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飯田様 ＬＩＦＥの皆様
こんにちは，
飯田さん：（それからええと，：）マーカーを設計するというのが良く分からないので
教えて下さい．）
木賀：説明不足ですいません。
RNAでも、大腸菌でも、いろいろな遺伝型をもつプールの中から「当たり」を単離
するために何らかの指標が必要です。（以下略）
飯田さん：ええとようするに，
・マーカ− ＝ 菌の生育に必須な遺伝子
・初期処理 マーカーの途中に UGAとかSTOPコードを入れておく，たぶん，
遺伝子相同組み替えでやるんでしょうね．
・サプレッサーtRNA ＝ STOPコドンに対応するアンチコドンを持つにもかかわらず，
ARSが作用してSTOPが入った部分のアミノ酸がくっついてし
まうもの．
・サプレッサーtRNAの選択？ 菌のtRNAの遺伝子に突然変異を起こしまくって生き残って
いる菌を釣ってくる．
といった感じの実験ですね？
木賀：おおむねその通りです。
stopコドンをもったマーカー遺伝子を準備するには初期処理にはいくつかあります。
一つは飯田さんが指摘なさったように、菌のゲノム上の対応する野生型マーカー遺伝
子を相同組換えで破壊する場合です。実験上の確認作業を楽にするため、stopコドン
を導入したマーカー遺伝子はプラスミド等で供給することが多いです。２つめは適切
な遺伝子に都合良くstopコドンが入った菌株を探す方法です。３つめはとして、抗生
物質耐性遺伝子等、大腸菌が本来持っていないマーカー遺伝子をプラスミドで供給す
ることもあり得ます。サプレッサーtRNAの選択はその通りです。
サプレッサーtRNA自体の研究は、大腸菌を利用した分子遺伝学の初期に盛んだったよ
うです。
UP BIOLOGY96、tRNAの分子遺伝学
小関治男 著、東京大学出版会、１９９６年
が良い解説書かと思います。
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東京大学 大学院理学系研究科 生物化学専攻
横山研究室 木賀大介
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